【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：結(jié)核分枝桿菌抗體（IgG）檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規(guī)格】
48人份/盒、96 人份/盒。
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品用于定性檢測(cè)人血清或血漿中結(jié)核分枝桿菌抗體(IgG)。
本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不得作為確診或排除的唯一依據(jù)。ELISA檢測(cè)結(jié)核病患者抗體還不能嚴(yán)格區(qū)分是近期感染、既往感染，還是隱性感染，尚不能作為療效考核的依據(jù)。但活動(dòng)性肺結(jié)核抗結(jié)核抗體陽(yáng)性率明顯高于既往結(jié)核分枝桿菌感染患者，兩組之間陽(yáng)性率具有顯著差異，說(shuō)明血清或血漿中結(jié)核抗體檢測(cè)對(duì)于鑒別活動(dòng)性肺結(jié)核和既往結(jié)核分枝桿菌感染患者具有輔助診斷價(jià)值。
【檢驗(yàn)原理】
本品由基因重組表達(dá)的結(jié)核分枝桿菌多表位融合抗原包被酶聯(lián)板，加待測(cè)血漿或血清，如待測(cè)樣品中存在結(jié)核抗體，形成抗原抗體特異結(jié)合，再加入抗人IgG 酶標(biāo)抗體與其反應(yīng) ，經(jīng)酶底物顯色，以顏色的深淺判斷樣品中結(jié)核抗體。
【主要組成成分】
（1） TB-抗原包被板 1塊 96人份 1塊48人份
（2） 酶結(jié)合物 20mL×1瓶 6mL×1瓶
（3） 陽(yáng)性對(duì)照 1mL×1瓶 1mL×1瓶
（4） 陰性對(duì)照 1mL×1瓶 1mL×1瓶
（5） 洗滌液（用前1：20稀釋） 50mL×1瓶 30mL×1瓶
（6） 顯色劑 A 6mL×1瓶 3mL×1瓶
（7） 顯色劑 B 6mL×2瓶 3mL×1瓶
（8） 終止液 6mL×1瓶 3mL×1瓶
（9） 樣品稀釋液 20mL×1瓶 6mL×1瓶
（10）不干膠片 3張 3張
試劑組成：
組份2酶結(jié)合物：Na2HPO4.12H2O 2.9g/L；NaCL 8g/L；KCL 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；復(fù)合酶穩(wěn)定劑AES 0.6g/L；辣根過(guò)氧化物酶保護(hù)劑1.0g/L；小牛血清 500mL/L；山羊血清 500mL/L；指示劑1 1.3mL/L；硫柳汞1g/L；抗-TB-HRP適量。
組份3陽(yáng)性對(duì)照：Na2HPO4.12H2O 2.9g/L；NaCL 8g/L；KCL 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；乙二醇 150mL/L；小牛血清 250mL/L；硫柳汞1g/L；指示劑1 1.25mL/L；陽(yáng)性血清適量。
組份4陰性對(duì)照：Na2HPO4.12H2O 2.9g/L；NaCL 8g/L；KCL 0.2g/L；KH2PO4 0.2g/L；乙二醇150mL/L；硫柳汞1g/L；陰性血清250mL/L。
組份5洗滌液: NaCL 160g/L；Na2HPO4.12H2O 58g/L；KCL 4g/L；KH2PO4 4g/L；Tween-20 10mL/L。
組份6顯色劑A：檸檬酸8g/L；8-羥基喹啉0.004g/L；冰醋酸2.4mL/L；過(guò)氧化尿素0.7g/L。
組份7顯色劑B：檸檬酸2.1g/L；乙二胺四乙酸二鈉0.38g/L；TMB 0.4g/L。
組份8終止液：濃硫酸110mL/L。
組份9樣品稀釋液：Tris Base 2.4g/L；NaCL 17.8g/L；酪蛋白鈉5g/L；牛血清白蛋白2g/L；吐溫-20 1mL/L；曲拉通X-100 1mL/L；山羊血清50mL/L；硫柳汞0.4g/L。
需要但未提供的物品：新鮮的蒸餾水或去離子水、一次性手套、精確的微量移液器和潔凈的吸頭、干凈的吸水紙、37℃恒溫箱或水浴鍋、計(jì)時(shí)器、洗板機(jī)或洗瓶、振蕩器。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
生產(chǎn)日期及有效期見(jiàn)標(biāo)簽。
【適用儀器】
自動(dòng)酶標(biāo)測(cè)定儀，波長(zhǎng)：450nm
【樣本要求】
（1）樣本采集不需要特殊準(zhǔn)備，不需要受檢者禁食。
（2）樣本可使用血清或血漿，檸檬酸、肝素或EDTA等抗凝劑不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（3）高度溶血的樣本、沒(méi)完全收縮的血清樣本以及有微生物污染的樣本會(huì)引起錯(cuò)誤的結(jié)果，可導(dǎo)致假陽(yáng)性率上升。
（4）盡可能采用新鮮血檢測(cè)，樣本保存在室溫下不要超過(guò)8小時(shí)。
（5）如果不能在8小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，請(qǐng)將樣本置2～8℃冷藏保存；如果不能在48小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，或者需要將樣本進(jìn)行運(yùn)輸，請(qǐng)將樣本置-20℃或更低溫度冷藏。
（6）冷凍樣本在解凍之后，檢測(cè)前必須充分混勻；樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)造成樣本中IgG蛋白聚合，可導(dǎo)致假陽(yáng)性率上升，也可導(dǎo)致真陽(yáng)性檢出率下降。
【檢驗(yàn)方法】
（1）每次試驗(yàn)設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔、分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100μL，再設(shè)一孔空白對(duì)照，加樣品稀釋液100μL。其余孔加入100μL樣品稀釋液，再加待測(cè)血清10μL。充分混勻后，置37℃溫育30分鐘。棄去孔內(nèi)樣品，扣干。
（2）用洗滌液注滿每孔（至少300μL洗滌液/孔），勿溢出，靜置5秒鐘后扣干，重復(fù)5次。
（3）每孔加酶結(jié)合物100μL（空白對(duì)照孔除外），置37℃溫育20分鐘，同上法洗反應(yīng)板5次。
（4）每孔加顯色劑A液、B液各50μL，輕輕振蕩后，37℃避光靜置10分鐘。
（5）每孔加入終止液50μL終止反應(yīng)，以空白調(diào)零，在酶標(biāo)儀中讀取各孔OD450。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
（1）測(cè)定：以酶標(biāo)儀單波長(zhǎng)450nm 或雙波長(zhǎng)450nm/630nm測(cè)定各孔OD值。（用單波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)需設(shè)空白對(duì)照孔。）
陽(yáng)性對(duì)照每孔OD值≥0.8；0.00< 陰性對(duì)照OD值≤0.12。
（2）臨界值（Cutoff）計(jì)算：陰性對(duì)照平均OD值＋0.12。
備注：陰性對(duì)照OD值低于0.06，以0.06計(jì)算，高于0.06按實(shí)際值計(jì)算。
(3) 結(jié)果解釋:樣品OD值≥臨界值（Cutoff）為結(jié)核抗體陽(yáng)性；樣品OD值﹤臨界值（Cutoff）為結(jié)核抗體陰性。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
本品僅用于檢測(cè)血清或血漿中結(jié)核抗體，用于體外檢測(cè)，結(jié)核病人輔助診斷。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
（1） 結(jié)核分枝桿菌抗體企業(yè)參考品檢定結(jié)果：
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陰性參考品符合率 |
陽(yáng)性參考品符合率 |
靈敏度參考品 |
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TB參考品 |
≥90% |
100% |
合格 |
（2）對(duì)臨床400例標(biāo)本檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)結(jié)果：
肺結(jié)核病人標(biāo)本：（122+104）/252×100%=89.68%
結(jié)核性胸膜炎病人標(biāo)本：（7+15）/27×100%=81.48%
肺外結(jié)核病人標(biāo)本：（2+13）/21×100%=71.4%
總敏感度病人標(biāo)本：（122+104+7+15+2+13）/(252+27+21)×100%=87.67%
特異性：（100-7）/100×100%=93%
總樣本符合率：（263+93）/400×100%=89.00%
（3）檢測(cè)試劑盒對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，紅斑狼瘡，甲狀腺異常，糖尿病以及肺部感染患者樣本進(jìn)行測(cè)定的試驗(yàn)，以觀察與相關(guān)疾病交叉反應(yīng)性。結(jié)果在163例樣品中假陽(yáng)性率為8%。與文獻(xiàn)報(bào)道假陽(yáng)性率4.6-11.3%基本一致；說(shuō)明試劑與上述疾病具有一定的交叉反應(yīng)性，另外也可能與受試者生活在結(jié)核病高度流行環(huán)境，個(gè)體隱性感染有關(guān)，但目前沒(méi)有發(fā)病，特別是肺部感染疾病。
（4）主要干擾物高血脂（甘油三酯濃度含量不高于2.1mmoL/L）、高膽固醇（膽固醇濃度含量不高于8.5mmoL/L）和血紅蛋白（血紅蛋白濃度不高于210g/L）對(duì)本品的干擾試驗(yàn)結(jié)果表明，三種干擾物均不影響本品的檢測(cè)結(jié)果。
【注意事項(xiàng)】
（1）濃縮洗滌液使用前，用蒸餾水稀釋20倍后使用。
（2）不同批號(hào)試劑不可混合使用。
（3）必須嚴(yán)格控制溫育反應(yīng)板的溫度和時(shí)間。
（4）結(jié)果判定以儀器測(cè)定為準(zhǔn)，不能憑肉眼觀察。
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